當(dāng)細(xì)胞所處溫度低于0°C時(shí)，細(xì)胞脫水，細(xì)胞中可溶性物質(zhì)濃度升高，并在細(xì)胞內(nèi)形成冰晶，冰晶的大小對(duì)細(xì)胞的影響是不同的，大冰晶容易造成細(xì)胞膜、細(xì)胞器的損傷和破裂，故造成復(fù)蘇出來的細(xì)胞存活率、狀態(tài)等與凍存前的狀態(tài)相差甚遠(yuǎn)。因此，我們?cè)趦龃婕?xì)胞的時(shí)候會(huì)采取兩個(gè)措施，一加入低溫保護(hù)劑，二慢凍細(xì)胞。

凍存時(shí)機(jī)：細(xì)胞應(yīng)在生長(zhǎng)良好、密度約為 80-90％、數(shù)目一般為 10 6 -10 7 /ml，活力差的細(xì)胞在凍存后的成活率很小。

低溫保護(hù)劑：常用的低溫保護(hù)劑是二甲基亞砜DMSO，它是一種滲透保護(hù)劑，可迅速透入細(xì)胞，提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性，降低冰點(diǎn)，延緩凍結(jié)過程，能使細(xì)胞內(nèi)水分在凍結(jié)前透出細(xì)胞外，在胞外形成冰晶，減少胞內(nèi)冰晶，從而減少冰晶對(duì)細(xì)胞的損傷。

慢凍細(xì)胞：可以使用程序性降溫盒，緩慢凍存細(xì)胞，可使細(xì)胞內(nèi)避免產(chǎn)生大的冰晶。如果沒有程序降溫盒，可以將凍存細(xì)胞依次放于4度1h，-20度2h，-80過夜，大部分細(xì)胞也可以適應(yīng)。

凍存液配置：凍存液應(yīng)該提前配制，置于室溫備用，防止臨時(shí)配制產(chǎn)生的熱量損傷細(xì)胞（DMSO加入到培養(yǎng)基中會(huì)放熱），凍存液常規(guī)配比為培養(yǎng)基：血清：DMSO=7:2:1，如果細(xì)胞比較珍貴，可以調(diào)整為血清：DMSO=9:1。